(ஃப்ளோ சைட்டோமெட்ரி, FCM) என்பது கறை படிந்த செல் குறிப்பான்களின் ஒளிரும் தீவிரத்தை அளவிடும் ஒரு செல் பகுப்பாய்வி ஆகும். இது ஒற்றை செல்களின் பகுப்பாய்வு மற்றும் வரிசைப்படுத்தலின் அடிப்படையில் உருவாக்கப்பட்ட ஒரு உயர் தொழில்நுட்ப தொழில்நுட்பமாகும். இது செல்களின் அளவு, உள் அமைப்பு, டிஎன்ஏ, ஆர்என்ஏ, புரதங்கள், ஆன்டிஜென்கள் மற்றும் பிற இயற்பியல் அல்லது வேதியியல் பண்புகளை விரைவாக அளவிடவும் வகைப்படுத்தவும் முடியும், மேலும் இந்த வகைப்பாடுகளின் தொகுப்பை அடிப்படையாகக் கொண்டது.
ஓட்ட சைட்டோமீட்டர் முக்கியமாக பின்வரும் ஐந்து பகுதிகளைக் கொண்டுள்ளது:
1 ஓட்ட அறை மற்றும் திரவவியல் அமைப்பு
2 லேசர் ஒளி மூலம் மற்றும் கற்றை வடிவமைக்கும் அமைப்பு
3 ஒளியியல் அமைப்பு
4 மின்னணுவியல், சேமிப்பு, காட்சி மற்றும் பகுப்பாய்வு அமைப்பு
5 செல் வரிசையாக்க அமைப்பு
அவற்றில், லேசர் ஒளி மூலத்திலும் பீம் உருவாக்கும் அமைப்பிலும் உள்ள லேசர் தூண்டுதல், ஓட்ட சைட்டோமெட்ரியில் ஃப்ளோரசன்ஸ் சிக்னல்களின் முக்கிய அளவீடாகும். தூண்டுதல் ஒளியின் தீவிரம் மற்றும் வெளிப்பாடு நேரம் ஆகியவை ஃப்ளோரசன்ஸ் சிக்னலின் தீவிரத்துடன் தொடர்புடையவை. லேசர் என்பது ஒற்றை அலைநீளம், அதிக தீவிரம் மற்றும் அதிக நிலைத்தன்மை கொண்ட வெளிச்சத்தை வழங்கக்கூடிய ஒரு ஒத்திசைவான ஒளி மூலமாகும். இந்தத் தேவைகளைப் பூர்த்தி செய்ய இது சிறந்த தூண்டுதல் ஒளி மூலமாகும்.
லேசர் மூலத்திற்கும் ஓட்ட அறைக்கும் இடையில் இரண்டு உருளை லென்ஸ்கள் உள்ளன. இந்த லென்ஸ்கள் லேசர் மூலத்திலிருந்து வெளிப்படும் வட்ட குறுக்குவெட்டு கொண்ட லேசர் கற்றையை சிறிய குறுக்குவெட்டு (22 μm × 66 μm) கொண்ட நீள்வட்ட கற்றைக்குள் குவிக்கின்றன. இந்த நீள்வட்ட கற்றைக்குள் உள்ள லேசர் ஆற்றல் ஒரு சாதாரண விநியோகத்தின்படி விநியோகிக்கப்படுகிறது, இது லேசர் கண்டறிதல் பகுதி வழியாக செல்லும் செல்களுக்கு நிலையான வெளிச்ச தீவிரத்தை உறுதி செய்கிறது. மறுபுறம், ஆப்டிகல் அமைப்பு பல செட் லென்ஸ்கள், பின்ஹோல்கள் மற்றும் வடிகட்டிகளைக் கொண்டுள்ளது, அவை தோராயமாக இரண்டு குழுக்களாகப் பிரிக்கப்படலாம்: ஓட்ட அறையின் மேல் மற்றும் கீழ்.
ஓட்ட அறைக்கு முன்னால் உள்ள ஒளியியல் அமைப்பு ஒரு லென்ஸ் மற்றும் ஊசி துளையைக் கொண்டுள்ளது. லென்ஸ் மற்றும் ஊசி துளையின் (பொதுவாக இரண்டு லென்ஸ்கள் மற்றும் ஒரு ஊசி துளை) முக்கிய செயல்பாடு, லேசர் மூலத்தால் உமிழப்படும் வட்ட குறுக்குவெட்டுடன் கூடிய லேசர் கற்றையை சிறிய குறுக்குவெட்டுடன் கூடிய நீள்வட்ட கற்றைக்குள் குவிப்பதாகும். இது லேசர் ஆற்றலை ஒரு சாதாரண விநியோகத்தின்படி விநியோகிக்கிறது, லேசர் கண்டறிதல் பகுதி முழுவதும் செல்களுக்கு சீரான வெளிச்ச தீவிரத்தை உறுதி செய்கிறது மற்றும் தவறான ஒளியிலிருந்து குறுக்கீட்டைக் குறைக்கிறது.
வடிப்பான்களில் மூன்று முக்கிய வகைகள் உள்ளன:
1: நீண்ட பாஸ் வடிகட்டி (LPF) - ஒரு குறிப்பிட்ட மதிப்பை விட அதிக அலைநீளம் கொண்ட ஒளியை மட்டுமே கடந்து செல்ல அனுமதிக்கிறது.
2: ஷார்ட்-பாஸ் வடிகட்டி (SPF) - ஒரு குறிப்பிட்ட மதிப்பிற்குக் குறைவான அலைநீளங்களைக் கொண்ட ஒளியை மட்டுமே கடந்து செல்ல அனுமதிக்கிறது.
3: பேண்ட்பாஸ் வடிகட்டி (BPF) - ஒரு குறிப்பிட்ட அலைநீள வரம்பில் உள்ள ஒளியை மட்டுமே கடந்து செல்ல அனுமதிக்கிறது.
வடிகட்டிகளின் வெவ்வேறு சேர்க்கைகள் வெவ்வேறு அலைநீளங்களில் ஒளிரும் சமிக்ஞைகளை தனிப்பட்ட ஒளிப்பெருக்கி குழாய்களுக்கு (PMTs) இயக்கும். எடுத்துக்காட்டாக, PMTக்கு முன்னால் பச்சை ஒளிரும் (FITC) கண்டறிவதற்கான வடிப்பான்கள் LPF550 மற்றும் BPF525 ஆகும். PMTக்கு முன்னால் ஆரஞ்சு-சிவப்பு ஒளிரும் (PE) ஐக் கண்டறியப் பயன்படுத்தப்படும் வடிப்பான்கள் LPF600 மற்றும் BPF575 ஆகும். PMTக்கு முன்னால் சிவப்பு ஒளிரும் (CY5) ஐக் கண்டறிவதற்கான வடிப்பான்கள் LPF650 மற்றும் BPF675 ஆகும்.
செல் வரிசைப்படுத்தலுக்கு ஓட்ட சைட்டோமெட்ரி முக்கியமாகப் பயன்படுத்தப்படுகிறது. கணினி தொழில்நுட்பத்தின் முன்னேற்றம், நோயெதிர்ப்பு அறிவியலின் வளர்ச்சி மற்றும் மோனோக்ளோனல் ஆன்டிபாடி தொழில்நுட்பத்தின் கண்டுபிடிப்புடன், உயிரியல், மருத்துவம், மருந்தகம் மற்றும் பிற துறைகளில் அதன் பயன்பாடுகள் பெருகிய முறையில் பரவலாகி வருகின்றன. இந்த பயன்பாடுகளில் செல் இயக்கவியல் பகுப்பாய்வு, செல் அப்போப்டோசிஸ், செல் தட்டச்சு, கட்டி நோயறிதல், மருந்து செயல்திறன் பகுப்பாய்வு போன்றவை அடங்கும்.
இடுகை நேரம்: செப்-21-2023
